引物稀释
1.引物开盖前先离心：4000rpm，30~60s
2.慢慢打开管盖，加入适量缓冲溶液或水（参见sangon 报告）
forward：共2od，加116ul的缓冲液配成100uM的储存液
reverse：共2od，加100ul的缓冲液配成100uM的储存液
3.盖上盖后充分震荡混匀
4.工作液：从储存液中吸取10ul稀释至90ulDEPC水成10uM工作液。
5.定量pcr实验：上下游引物各加1~2ul。
内参GAPDH不用稀释。
合成的引物怎么溶解
◆干粉引物溶解稀释方法：
收到引物后,在开启离心管盖前在3000-4000转/分钟的转速下离心1分钟,以防开盖时引物干粉散失.引物保存在高浓度的状况下比较稳定.如果对实验的重复性要求较高,合成的OD数较大,建议分装,避免反复冻融.引物一般配制成10-100pmol/uL(umol/L).
引物管上标有1OD 相当于多少umol 的计算结果,进行稀释时的引物加水量可以按以下公式计算：
稀释成100pmol/ul 1OD 需加水量（ul）=1OD相当于umol 数×10000
例如,您拿到的引物DNA合成报告单上标有1OD≈0.0035umol ,包装量是1OD/管,如果您希望将引物浓度定为10umol/L,那么只需用350ul无核酸酶的双蒸水将1OD的引物干粉溶解即可.
◆液体引物再稀释可用下列公式：
稀释引物要达到的浓度（pmol/ul）＝母液浓度（pmol/ul）×汲取母液的体积（ul）÷（汲取母液的体积（ul）＋加水量（ul））
引物一般来的时候是干粉.这种状态能保存最长的时间.
如果用的话要先离心,5分钟（12000转）.然后用它上面写的nmol*1000/你的终浓度=你要加的水量
溶解液有TE和dd水.TE其实就是tris盐酸和EDTA的混合液.理论上用TE保存好,不容易降解.
一般配的时候要先配成储存液（浓度是100umol/L）,在配成使用液（浓度是10umol/L）.这样的好处是引物不容易降解.
引物忌讳反复冻溶,大家要注意.如果你都配成了使用液就应该分装.使用液放在4度（2/3个月没问题的）,储存液放在-20度.
引物稀释很简单,一般装引物的管子上都标有引物的量如3.6nmol/OD,可直接往管中加360ul的无菌双蒸水溶解就可以了,在加水之前要先高速离心管子几分钟,加水后要高速漩涡混匀几分钟就可以用了,此时的储存浓度是10umol/L,如果体系是20ul一般加1ul引物(引物的使用浓度最大为10pmol/ul,但一般在0.5-5pmol/ul即可 ).
引物的浓度设定,不同的人有不同习惯,有的喜欢稀释成100uM的,有的习惯于稀释成20uM,也有的稀释成10uM的.建议稀释成20uM的浓度,因为如果你稀释成100uM,当你所做PCR的体系不是很大的时候,体积太小了引物就不好加,容易产生误差；如果是稀释成10uM,引物浓度过低,容易降解.不过不管你稀释成多大浓度的,最好分装保存,免得反复冻融容易降解.
请问引物是怎么稀释的？
上面网友讲的估计应该会出现在你合成的引物单上。
在实际操作时，你首先需要进行离心。离心前请不要打开盖子。
离心后，在离心管底可见白色沉淀，这时你可根据合成单上的说明，加入适量的ddH2O或者Elution Buffer。合成单上标有Tm值，OD值以及引物长度等。通常，会有1OD=?ug的标记（由于引物长度不同，此处数值也对应不同），直接按？？值加入等量ddH2O（如20ug对应加入20ul水）便可稀释为1ug/ul
最后充分涡旋，使沉淀完全溶解。
-20度保存，使用时，应稀释10倍。
引物稀释后能保存多久?在什么温度保存合适?谢谢!
引物在溶解前，室温状态下都可以长期保存。使用pH7.5-8.0的TE 缓冲液溶解引物，在-20℃可以保存两个月甚至半年以上，-4℃保存两周一般也没有问题。
不建议使用蒸馏水溶解引物，因为有些蒸馏水的 pH 值比较低（ pH4-5 ） ， 引物在这种条件下不稳定。 另外需要提醒的是收到引物后一定先离心，将引物粉末收集于管底再打开离心管。
特异性
引物设计完成以后，应对其进行BLAST检测。如果与其它基因不具有互补性，就可以进行下一步的实验了。
值得一提的是，各种模板的引物设计难度不一。有的模板本身条件比较困难，例如GC含量偏高或偏低，导致找不到各种指标都十分合适的引物；用作克隆目的的PCR，因为产物序列相对固定，引物设计的选择自由度较低。在这种情况只能退而求其次，尽量去满足条件。
【求助】请问引物合成后,该怎样保存,使用时该怎样稀释?
引物合成后干粉状态在室温下可以放半年,溶解后室温下也可以放一周,但是最好是-20度保存.你可以用灭菌水进行稀释,不过用TE进行稀释更有利于引物的保存,浓度看你自己的需要了 ,每个人都有自己的习惯,有的稀释成20uM,有的稀释成10uM,有的稀释成100uM都可以.保存在-20度,稀释可以加DDH2O,加多少合成引物时,公司会告诉你的,不稀释,直接-20度保存可以吗?引物刚拿回来要离心.因为干粉可能粘在管口处.离心后可以直接放－20度.用的时候根据需要稀释.可以的
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